大肠杆菌蛋白表达感受态细胞的制备

感受态，是指宿主细胞最容易接受外源基因并实现将其转化的一种生理状态，它是由受体菌的遗传性状所决定的，同时也受菌龄以及外界环境因子的影响， 比如Ca²⁺就可以大大促进转化的作用。细胞的感受态一般出现在对数生长期，新鲜幼嫩的细胞是制备感受态细胞和进行成功转化的关键。

LB培养基（固体、液体）：Tryptone 1.00g，Yeast 0.50g，NaCl 1.00g，定容至100ml。（固体培养基加入1.5%的琼脂）

抗性：卡那霉素，氨卞青霉素，氯霉素，四环素。

• 取－80℃冻存的感受态菌株，用接种环划线分离接种于固体平板上（平板抗性根据感受态选择），做好标记，倒置于37℃培养箱培养过夜。
• 第二天，从平板上挑取单个菌落，接种至含有4ml LB培养液（抗性根据感受态选择）的试管中，37℃,195rpm，震荡培养过夜。次日取菌液4ml接种至含有400ml LB培养基（抗性根据感受态选择）的2L摇瓶中，37℃，200rpm震荡培养约2-3小时。
• 当菌落OD600nm值达到0.3－0.5时，将摇瓶取出放置于冰上10-15min。在无菌条件下把菌液倒入500ml的预冷的离心管中，离心4℃,3000r，8min。
• 弃去上清，加入约200ml的预冷的CaCl2溶液，吹打混匀，悬浮菌体，放入冰浴30min。
• 离心4℃,3000r，8min，弃去上清，加入约8ml预冷的CaCl2溶液，重新悬浮菌体。
• 将用CaCl2溶液处理后的菌体分装于1.5ml的EP管中，每管110ul，保存于-80℃的超低温冰箱中。