CD34+造血干细胞转染神器：ProteanFect Max

CD34+造血干细胞是血液系统中的关键细胞，具有自我更新和多向分化潜能。通过转染技术，可以研究基因功能并开发新的治疗策略。ProteanFect Max作为一种高效的转染试剂，已被证明能显著提高mRNA转染效率，且对细胞分化影响较小。

2. 材料与方法

2.1 CD34+造血干细胞的分选

2.2 培养基的配制

• SFEM II培养基（Stemcell, 09655）和StemSpan™ CC100（Stemcell, 02690）以99:1比例混合。
• 若添加抗生素，需稀释1000倍。
• 配制完成后，培养基应放置于4°C冰箱储存，并尽量在1个月内使用完。

2.3 细胞培养与传代

• 分选后的CD34+细胞以300g离心5分钟，用1 mL完·全培养基重悬后计数。
• 根据计数结果，将细胞重悬至105 cells/mL的密度，接种到T25培养瓶或细胞培养板中。
• 3天后补液一次，若进行转染实验，需调整细胞密度至2×105 cells/mL，并隔天补液。

2.4 转染操作

• 转染核酸：mRNA。
• 转染培养基：使用Opti-MEM培养基或无血清RPMI 1640/无血清DMEM培养基。
• 转染体系：配置ProteanFect Max转染体系，具体protocol需参考私戳获取。
• 细胞准备：确保细胞活率超过90%，避免反复离心。
• 转染过程：孵育时间建议15分钟，适当延长可提高转染率，但可能影响细胞活力。
• 效率检测：使用阳性对照mRNA，转染后5-48小时内观察EGFP表达。细胞活率可通过镜下观察、台盼蓝、AO/PI染色或流式细胞术检测。

3. 结果

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