核酸纯化试剂的使用方法和注意事项

　　01、保持核酸分子一级结构的完整性

　　02、尽量排除其他分子的污染，保证核酸样品的纯度

　　细胞分裂

　　1、物理作用：低渗透分解、超声波分解、冻融分解、研磨、匀浆等。 用玻璃珠、超声波、研磨等方法破碎细胞;

　　2、化学作用： CTAB法、SDS处理等;

　　烷基三甲基溴铵是阴离子清除剂，溶解细胞膜，与核酸形成复合体。 该复合体可溶于高盐溶液，可用有机溶剂提取，去除蛋白、多糖、酚类等杂质后，加入乙醇沉淀，从而分离核酸。

　　碱分解法是质粒DNA的常用提取方法。 染色体DNA远大于质粒DNA分子，染色体DNA为线状分子，而质粒DNA为共价键环状分子。 用碱处理DNA溶液时，线状染色体DNA容易变性。 共价键环状质粒DNA恢复中性PH后恢复天然构象，变性染色体DNA的片段与变性蛋白质和细胞片段结合沉淀，成为具有复性的超螺旋质粒DNA

　　3、酶作用：加入溶菌酶和蛋白酶等

　　在纯化具有细胞壁的微生物样本时，加入溶菌酶等溶解细胞壁，进行以下分离和纯化。 蛋白酶k是从白色中分离出来的强力蛋白溶解酶，用于清除核酸酶和其他蛋白污染。

　　分离和纯化

　　1、加入浓盐溶液：盐浓度不同的溶液中，DNA、RNA的溶解度不同

　　2、加入SDS :将核酸从蛋白质上游分离出来

　　3、萃取：疏水性蛋白在有机相中，核酸残留在上层水相中

　　4、硅胶吸附：硅胶膜吸附核酸

　　5、磁珠吸附：利用磁珠选择性吸附核酸

　　分离方法的优缺点：

　　1、RNA回收效率高、耗时长、不利于自动化，也不利于基因组DNA污染

　　2、盐析法：产量低，不适合自动提取

　　3、硅胶吸附法：纯度高、简单方便、无毒性、可自动化

　　4、磁珠吸附法：产量高、纯度好，可以实验特异种的核酸分离，可以自动化

　　5、加热煮沸法：只用于纯化DNA，成本低、纯度低、产量低

　　清洗和溶解

　　清洗：进一步除去杂质，通常使用75%乙醇

　　溶解：一般使用无核酸酶水或TE缓冲液