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蛋白提取试剂盒的使用方法

更新时间:2023-02-10

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   本试剂盒提供全套试剂,适用于从各种哺乳动物细胞(原代或传代细胞、贴壁或悬浮细胞等)和各种实体软组织(如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织)提取总蛋白。提取过程简单方便,无须超速离心机。本试剂盒含有的du特变性剂能够溶解细胞膜包括细胞质膜和核膜。提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫共沉淀等蛋白研究。
 
  使用方法:
  A. 细胞总蛋白提取
  1. 每500 μl裂解液,在使用前数分钟内加入5 μl PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。
  2. 取5-10×106个细胞,在4℃,500 g条件下离心5-10分钟,小心吸取培养基,尽可能吸干,收集细胞。
  3. 用冷PBS洗涤细胞两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。
  4. 每5×106个细胞中加入500 μl冷的裂解液,混匀后,在4℃条件下振荡15-20分钟。
  5. 在4℃,16,000 g条件下离心15分钟。
  6. 快速将上清转移至另一预冷的干净离心管,即可得到总蛋白。
 
  B. 组织总蛋白提取
  1. 每500 μl裂解液,在使用前数分钟内加入5 μl PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。
  2. 取100 mg组织样本剪碎,加入裂解液,用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体。
  3. 将组织匀浆吸入另一预冷的干净离心管中,在4℃,16000 g条件下离心5分钟。
  4. 快速将上清转移至另一预冷的干净离心管,即可得到总蛋白。
  上述蛋白提取物可立即用于后续实验,或分装后于-80℃冰箱保存备用。
  注意事项:1. 实验过程中的所有试剂可冰上预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。
  2. 整个过程须保持样品处于低温状态。
  3. 蛋白浓度用BCA法测定 。
  以上就是蛋白提取试剂盒的使用方法,以上知识仅供参考,希望对您有所帮助!
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